1. 首先设置好内参和对照组(在 Analysis Settings 处),一般我们在上机前会对应设置好的,如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。
2. 点击进去后,选择对应好的内参和对照组。
3.选择好内参和对照组后,我们首先看看 PCR 跑的有没有问题。
4. 溶解曲线:表示随温度升高 DNA 的双螺旋结构降解程度的曲线。
5. 如果前面的几项都没有太大的问题的话。最后我们看看最重要的结果,也就是目的基因的变化情况了。
首先,看测序峰图,如果结果的彩图显示峰型是尖锐单一的,碱基所对应的编码是一致的,那么可以判断序列是可以使用的.如果出现双峰,信号中断等异常现象,那么需要重新制备或者克隆后再测序. 其次,将PCR产物在NCBI上blast,看是否与你预期想要的片段符合,如果是匹配度一致,那么可以进行下一步,例如克隆,表达等.如果是匹配度不高,那么建议重新制备,最好是采用touchdown或巢式PCR等方法,提高产物的特异性后再扩增测序. 另外,如果是做SNP分析的,那么需要你通过看测序彩图,找出相应的突变杂合位点.