1、培养料发酵
每100平方米可用稻草2000公斤、牲畜粪便1500环境、尿素15公斤、豆饼20公斤、过磷酸钙50公斤、石膏粉50公斤以及石灰30公斤作为培养料。
接下来就要做好培养料发酵的工作了，选择一个水源充足、排灌方便、靠近菇棚的地区，建堆前先将稻草预湿3-5天，使其吸水充分软化，再建堆，堆的规模视实际情况而定，在底层铺一层稻草，在撒入石灰、过磷酸钙、尿素等，一层草一层粪料，这样推满七层。在建堆时，1-3层无需浇水，以后每铺完一层要浇水一次，下层少浇，上层多浇水。
在建堆后要及时翻堆，使其发酵，每次将下层的料翻到上层，四周的翻到中间，中间的翻到四周，促使其发酵均匀。第一次翻堆在建堆6天后，以后每2-3天翻堆一次，直至其发酵完成，完成后经过消毒后移入菇房内。
2、菇房消毒
双孢菇在栽培时无需光照，在栽培时布置好菇床后，将菇房的卫生打扫干净，先用敌敌畏喷洒地面，每平米1克左右，再在地面撒施石灰粉，一般每平米1-2克。在给菇房消毒后，将培养料铺在床面上，要求料面整齐，厚度均匀，当培养料的温度低于25度时，将其轻轻拍平，松紧之一，操作人员要经过消毒。
