基因工程中常用的原核生物细胞表达体系包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等。这些体系具有以下特点:
1. 生长速度快,培养条件简单,成本低。
2. 易于操作和控制,易于进行大规模发酵。
3. 表达产物易于分离纯化。
4. 具有较高的表达效率。
下面是构建原核生物细胞表达体系的一般方法:
1. 选择合适的表达载体:选择带有目标基因启动子和终止子的表达载体,并确保其在原核生物中具有较高的转录和翻译效率。
2. 构建目标基因的表达质粒:使用限制性内切酶将目标基因克隆到表达载体中,并进行测序验证。
3. 将表达质粒转化到原核生物细胞中:使用感受态细胞将表达质粒转化到原核生物细胞中,并通过抗性筛选或 PCR 检测等方法验证转化效率。
4. 诱导表达:使用诱导剂(如IPTG)诱导目标基因的表达,并通过 Western blotting 或酶活性检测等方法验证表达产物的表达水平。
5. 分离纯化表达产物:使用分离纯化方法(如离心、层析等)将表达产物从细胞中分离出来,并进行纯化和鉴定。
需要注意的是,不同的原核生物细胞表达体系和目标基因可能需要采用不同的构建方法和表达条件,因此在实际操作中需要根据具体情况进行调整。
基因工程常用的原核生物表达体系是大肠杆菌,大肠杆菌来源方便,大肠杆菌质粒比较容易克隆,构建方法首先选择目的基因,然后加入到大肠杆菌质粒上,筛选克隆的大肠杆菌表达株,挑选出来进行培养。