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当载体和外源基因是平末端 怎样实现重组(基因同源重组的引物要怎么设计)

当载体和外源基因是平末端 怎样实现重组(基因同源重组的引物要怎么设计)

更新时间:2025-11-16 17:49:40

当载体和外源基因是平末端 怎样实现重组

方法非常多,列举一两个:

1. 不同的粘性末端不能相连。

所以,如果要相连,就要去除不同的粘性末端,进行平末端相连。粘末端变成平末端有两种方法:klenow酶的补平或者s1核酸酶的切平。为了减少载体自连,可以用碱性磷酸酶处理载体。最后将载体和目的基因链接,构建重组质粒。

2. 设计引物,自带酶切位点,扩增目的基因,直接改变目的基因的酶切位点,然后再用和载体相同的限制酶酶切目的基因,切出相同的粘性末端。直接将酶切完成的目的基因和载体连接。

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